電泳的目的
更新時間:2021-05-18 點擊次數(shù):1199
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于DNA樣品如何收集和準備進行研究:
在對DNA進行測序或通過基因工程對其進行改變之前,科學(xué)家先對其進行分離。這似乎是一項艱巨的任務(wù),因為細胞包含多種其他化合物,例如蛋白質(zhì),脂肪,糖和小分子。幸運的是,生物學(xué)家可以利用DNA的化學(xué)特性從這些污染物中分離出DNA,并為進一步研究做準備。此過程稱為DNA提取。
細胞裂解
有許多不同的技術(shù)用于DNA提取。單個實驗室所使用的DNA取決于要進行的實驗類型以及DNA的純度??茖W(xué)家通常從含有細胞的樣本開始,例如組織或血液樣本,然后將細胞弄開或裂解。您可以通過多種方式裂解細胞。添加清潔劑會使它們散開,并使其經(jīng)受高頻聲波?;蛘?,將樣品與玻璃珠混合并使其快速振動,會物理分裂細胞并釋放其內(nèi)容物。
快速和骯臟的方法
如果不需要高純度,科學(xué)家可以添加一種稱為蛋白酶K的酶來分解樣品中的大多數(shù)蛋白質(zhì),然后直接使用。但是,由于大多數(shù)污染物仍然存在,因此該技術(shù)非常骯臟,因此僅在優(yōu)先考慮速度且純度不成問題的情況下才適用。另一種快速而骯臟的方法是通過添加鹽(如銨鹽或乙酸鉀)以迫使蛋白質(zhì)沉淀來提高鹽濃度,從而去除蛋白質(zhì)。由于仍然存在許多其他污染物,因此該技術(shù)也相當臟。
苯fen-氯fang萃取
另一種方法是用去污劑溶解細胞,然后將溶液與yi戊醇,氯fang和苯fen混合。然后將溶液分為兩層。蛋白質(zhì)**終保留在上部有機層中,而DNA保留在下部水層中。此技術(shù)需要仔細控制鹽濃度和pH才能獲得良好結(jié)果。這很耗時,而且苯fen和氯fang都是劇毒化學(xué)品。因此,雖然苯fen-氯fang萃取曾經(jīng)是常規(guī)操作,但近年來其他技術(shù)也變得越來越流行。
陰離子交換色譜
與苯fen-氯fang萃取相比,陰離子交換色譜法具有更高的純度和更一致的結(jié)果。管或柱中裝有小顆粒,這些小顆粒上帶有帶正電荷的位點,帶負電荷的分子或陰離子可以與之結(jié)合。DNA與這些陰離子交換位點結(jié)合,而其他污染物(如蛋白質(zhì)和RNA)則從色譜柱上洗掉。之后,使用富含鹽的溶液將DNA從色譜柱中拉出。
套件
純化DNA,也許可靠的技術(shù)是使用特制試劑盒。這些套件在試管中包含硅膠膜。DNA會粘附在膜上,同時使用試劑盒隨附的一系列專門準備的鹽溶液將其他污染物洗掉。**后,用低鹽溶液從柱子上洗掉DNA。這些試劑盒快速,易于使用,并提供可重復(fù)的結(jié)果。
吸光度
一旦分離出DNA并將其重新懸浮在pH控制的緩沖溶液中,之后一步就是測試其純度。一種簡單方便的方法是檢查它在260和280納米波長處吸收了多少紫外線。如果DNA是純凈的,則260納米的吸光度除以280納米的吸光度應(yīng)等于1.8。通過測量260納米的吸光度,您還可以確定DNA的濃度。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于DNA樣品如何收集和準備進行研究。
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