網(wǎng)站導航

技術文章

當前位置:主頁 > 技術文章 > 上海嘉鵬對PCR引物設計原則的簡介
上海嘉鵬對PCR引物設計原則的簡介
更新時間:2016-03-18 點擊次數(shù):2443


首先引物與模板的序列要緊密互補,其次引物不能在模板的非目的位點引發(fā)DNA 聚合反應(即錯配) ,再次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結構。引物設計應注意如下要點:
1.引物的長度一般為15-30 bp,常用的是18-27 bp。
2.引物序列在模板內應當沒有相似性較高,尤其是3’端相似性較高的序列,否則容易導致錯配。引物3’端出現(xiàn)3 個以上的連續(xù)堿基,如GGG 或CCC,也會使錯誤引發(fā)機率增加。
3.引物3’端的末位堿基對Taq 酶的DNA 合成效率有較大的影響。不同的末位堿基在錯配位置導致不同的擴增效率,末位堿基為A 的錯配效率明顯高于其他3個堿基,因此應當避免在引物的3’端使用堿基A。
4.引物序列的GC 含量一般為40-60%,過高或過低都不利于引發(fā)反應。上下游引物的GC含量不能相差太大。
5.引物的另一個重要參數(shù)是熔解溫度(Tm)。這是當50%的引物和互補序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時的溫度。合理的退火溫度從55℃到70℃。為獲得*結果,兩個引物應具有近似的Tm值。
6.引物二聚體或發(fā)夾結構也可能導致PCR 反應失敗。應該盡量避免。

 

聯(lián)系方式

郵件:sh-jiapeng@163.com
傳真:021-36162369
郵編:200444
地址:上海市真陳路1398弄15號
在線客服 聯(lián)系方式 二維碼

服務熱線

021-66030766

掃一掃,關注我們